बिलीरुबिन पाउडर कैस 635-65-4मुख्यतः पित्त से निकाला जाता है। बिलीरुबिन पानी में अघुलनशील, बेंजीन, क्लोरोफॉर्म और कार्बन डाइसल्फ़ाइड जैसे कार्बनिक सॉल्वैंट्स में घुलनशील और इथेनॉल और ईथर में थोड़ा घुलनशील है। बिलीरुबिन को इथेनॉल और क्लोरोफॉर्म के गर्म मिश्रण में भी घोला जा सकता है। बिलीरुबिन का सोडियम नमक पानी में आसानी से घुलनशील होता है, लेकिन इसके कैल्शियम, मैग्नीशियम और बेरियम नमक पानी में अघुलनशील होते हैं। बिलीरुबिन हल्के नारंगी या गहरे लाल भूरे रंग वाला एक मोनोक्लिनिक क्रिस्टल है। इसका सूखा ठोस अपेक्षाकृत स्थिर होता है, और क्लोरोफॉर्म घोल भी अंधेरे में अपेक्षाकृत स्थिर होता है। यह क्षारीय घोल (जैसे कि 0.1mmol/L सोडियम हाइड्रॉक्साइड) में या त्रिसंयोजक लौह आयनों का सामना करने पर अस्थिर होता है, और जल्दी से बिलिवेरडीन में ऑक्सीकृत हो जाता है। बिलीरुबिन ग्लाइसिन, ऐलेनिन, या हिस्टिडीन से बंध सकता है। सीरम प्रोटीन, विटामिन या ईडीटीए जोड़ने से बिलीरुबिन को स्थिर किया जा सकता है।
1. कैल्शियम नमक की अप्रत्यक्ष निष्कर्षण विधि द्वारा कैल्शियम नमक तैयार करना: ताजे सुअर के पित्त में सरगर्मी के तहत 3-3.5 गुना संतृप्त चूने का पानी सतह पर तैरनेवाला मिलाएं, और फिर {{3} मिनट, पीएच के लिए हिलाते रहें। {4}}, धुंध के साथ 5{7}} डिग्री तक गर्म होने पर फोम को हटा दें, उबलने तक गर्म करना जारी रखें, 2 मिनट तक रखें, ठंडा करें, फ़िल्टर करें और कैल्शियम नमक प्राप्त करें। बिलीरुबिन तैयार उत्पाद की तैयारी: कैल्शियम नमक लें और पेस्ट बनाने के लिए इसमें 0.8 गुना पानी मिलाएं, इसे 30-40 जाली से छान लें, छानने में 0.3% एंटीऑक्सीडेंट मिलाएं, नमक और एसिड मिलाएं पीएच को 1.5 पर समायोजित करने के लिए, इसे 4 घंटे तक खड़े रहने दें, फ़िल्टर करें, फ़िल्टर केक में 80% इथेनॉल की मात्रा का 8-10 गुना डालें, क्रश करें और अच्छी तरह से मिलाएं, एंटीऑक्सीडेंट जोड़ें, इसे रात भर खड़े रहने दें, और प्राप्त करें अवक्षेप. 80% या अधिक इथेनॉल और एंटीऑक्सीडेंट की 4-6 गुना मात्रा मिलाएं, हिलाएं और रात भर भिगो दें। इस प्रक्रिया को 3-4 बार दोहराएं और तैयार बिलीरुबिन उत्पाद प्राप्त करने के लिए अवक्षेप को 70 डिग्री से नीचे सुखाएं।
कैल्शियम नमक अवक्षेपण [एचसीएल, भारी सोडियम सल्फाइट] → अवक्षेपण [इथेनॉल, भारी सोडियम सल्फाइट] → अवक्षेपण [70 डिग्री ] → बिलीरुबिन उत्पाद।
2. क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण विधि द्वारा कैल्शियम बिलीरुबिनेट की तैयारी: ताजा सुअर पित्त को सोडियम हाइड्रॉक्साइड के साथ पीएच 12 में समायोजित किया जाता है, उबलने के लिए गर्म किया जाता है, कैल्शियम क्लोराइड समाधान जोड़ा जाता है, फिर उबलने के लिए गर्म किया जाता है, ठंडा किया जाता है, कैल्शियम बिलीरुबिनेट प्राप्त करने के लिए फ़िल्टर किया जाता है। सुअर का पित्त [NaOH, CaCl2] → [pH 12, 100 डिग्री ] बिलीरुबिन पाउडर CAS की तैयारी 635-65-4 कैल्शियम नमक बिलीरुबिन तैयार उत्पाद: बिलीरुबिन कैल्शियम नमक को 1:1 हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ pH 1-2 पर समायोजित किया जाता है, अम्लीय पानी को सूखा दिया जाता है, क्लोरोफॉर्म को क्लोरोफॉर्म के साथ निकाला जाता है, निर्जल इथेनॉल से धोया जाता है, और घोल प्राप्त करने के लिए लगभग 5 डिग्री पर छोड़ दिया जाता है बिलीरुबिन तैयार उत्पाद।
बिलीरुबिन कैल्शियम नमक [एचसीएल] → [पीएच1-2] एसिड यौगिक [क्लोरोफॉर्म, निर्जल इथेनॉल] → [5 डिग्री] बिलीरुबिन तैयार उत्पाद
3. कैल्शियम नमक अम्लीकरण के लिए बेहतर कैल्शियम नमक विधि: ताजा सुअर का पित्त लें और उसमें 1% कैल्शियम हाइड्रॉक्साइड मिलाएं, अच्छी तरह से हिलाएं, जल्दी से 90-97 डिग्री तक गर्म करें, 10 मिनट तक गर्म रखें, और प्राप्त करने के लिए फ़िल्टर करें कैल्शियम नमक. 40 डिग्री तक गर्म करने पर ग्रीस जैसा दिखने लगेगा, जिसे धीरे से हटाया जा सकता है। अतिरिक्त क्षार और अन्य अशुद्धियों को दूर करने के लिए प्राप्त कैल्शियम नमक को एक बार गर्म पानी से धोया जा सकता है। कैल्शियम नमक लें और इसे समान रूप से फैलाने के लिए इसमें 10 गुना से अधिक मात्रा में पानी मिलाएं। 1% एंटीऑक्सीडेंट मिलाएं और बूंद-बूंद करके 1:2 हाइड्रोक्लोरिक एसिड डालने के लिए (60r/मिनट) हिलाएं। 40 मिनट के भीतर, पीएच 2.0 तक पहुंचें और अम्लीय पदार्थ प्राप्त करने के लिए पीएच अपरिवर्तित रहने तक प्रतीक्षा करें। सुअर का पित्त [1% कैल्शियम हाइड्रॉक्साइड] → [90-97 डिग्री, 15 मिनट] पित्त कैल्शियम नमक [एंटीऑक्सिडेंट, हाइड्रोक्लोरिक एसिड] → [पीएच2,40 मिनट] अम्लीय एसिड अल्कोहल से धोना, पानी से धोना: अम्लीकृत बिलीरुबिन कमरे के तापमान पर समान रूप से फैला हुआ होता है इथेनॉल की 10 गुना मात्रा के साथ, पीएच 5 से अधिक नहीं होना चाहिए, 0.5% एंटीऑक्सीडेंट जोड़ा जाता है, हिलाया जाता है और लेयरिंग के लिए लगभग 1 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है। अल्कोहल समाधान की ऊपरी परत पर जाएं और अवक्षेपित बिलीरुबिन को इकट्ठा करें। बिलीरुबिन को लगभग 5 मिनट तक 50 डिग्री गर्म पानी से धोएं, तैरते हुए बिलीरुबिन को इकट्ठा करें, निर्जलीकरण के लिए जल्दी से इथेनॉल डालें और क्रूड बिलीरुबिन प्राप्त करने के लिए इथेनॉल हटा दें। अम्लीय यौगिक [इथेनॉल] → [1एच] बिलीरुबिन को अवक्षेपित करें [50 डिग्री गर्म पानी] → [इथेनॉल] कच्चे बिलीरुबिन का निष्कर्षण, वाष्पीकरण, क्रिस्टलीकरण, और सुखाने: कच्चे बिलीरुबिन लें और 10 मिनट के लिए 50 डिग्री पर हिलाने के लिए 10 गुना क्लोरोफॉर्म मिलाएं। यदि आवश्यक हो, तो 2-3 बार निकालें, और अवशेष सफेद होना चाहिए। क्लोरोफॉर्म अर्क को लगभग सूखने तक वैक्यूम आसवन के अधीन किया गया, जिसके परिणामस्वरूप अधिकांश बिलीरुबिन क्रिस्टल का निर्माण हुआ। कमरे के तापमान तक ठंडा करने के बाद, इथेनॉल मिलाया गया और 10 मिनट के लिए 4 डिग्री तक ठंडा किया गया। उच्च गुणवत्ता वाले बिलीरुबिन प्राप्त करने के लिए बिलीरुबिन क्रिस्टल को फ़िल्टर किया गया और निर्जल इथेनॉल या ईथर के साथ इलाज किया गया, इसके बाद वैक्यूम सुखाने के बाद।
क्रूड बिलीरुबिन [क्लोरोफॉर्म] → [10 मिनट] क्लोरोफॉर्म घोल [क्रिस्टलीकरण] → उच्च गुणवत्ता वाला बिलीरुबिन
4.आयन एक्सचेंज रेजिन निष्कर्षण विधि द्वारा हाइड्रोलिसिस समाधान तैयार करना: ताजा गाय का पित्त लें, इसे धुंध से छान लें, हिलाते समय पीएच को 10 पर समायोजित करने के लिए 2mol/L सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल मिलाएं, हाइड्रोलाइज़ेट प्राप्त करने के लिए उबालें और फ़िल्टर करें।
हाइड्रोलिसिस समाधान राल स्तंभ द्वारा पित्त एसिड का सोखना और निक्षालन: उबले हुए हाइड्रोलिसिस समाधान को पहले से गरम राल स्तंभ में डालें जब तक कि प्रवाह का रंग गहरा न हो जाए और सोखना संतृप्त न हो जाए।
तब तक ठंडा पानी डालें जब तक कि कॉलम के अंदर का तापमान कमरे के तापमान तक न गिर जाए, और फिर प्रवाह का पीएच 1 बनाने के लिए कॉलम के शीर्ष से पतला सोडियम बाइसल्फाइट हाइड्रोक्लोराइड घोल डालें।
75% इथेनॉल से धोएं, जब एलुएंट गहरे हरे रंग का गंदला घोल हो तो एकत्र करें, और तब तक धोएं जब तक कि एफ्लुएंट साफ न हो जाए और पीएच तटस्थ के करीब न हो जाए। 95% इथेनॉल के साथ फिर से धोएं।
पित्त अम्ल की तैयारी के लिए इथेनॉल निक्षालन समाधान एकत्र करें। हाइड्रोलिसिस समाधान [आयन एक्सचेंज कॉलम] → [75% इथेनॉल, 95% इथेनॉल] बिलीरुबिन निक्षालन, एकाग्रता और सुखाने के लिए इथेनॉल एलुएंट: कॉलम से सभी 95% इथेनॉल छोड़ें, 10 मिनट के लिए क्लोरोफॉर्म में भिगोएँ, और क्लोरोफॉर्म एलुएंट को तब तक एकत्र करें जब तक कि यह समाप्त न हो जाए। पीला रंग दिखाई देता है.
क्लोरोफॉर्म एल्यूएंट को लगभग सूखापन तक आसवित करें, निर्जल इथेनॉल जोड़ें, और तब तक पुनर्प्राप्त करना जारी रखें जब तक क्लोरोफॉर्म न रह जाए। गर्म होने पर फ़िल्टर करें, बिलीरुबिन इकट्ठा करें, सुखाएं और तैयार बिलीरुबिन उत्पाद प्राप्त करें।
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